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Ulixertinib (BVD-523)：靶向ERK1/2信号通路的高特异性抑制剂及其在基础与转化医学研究中的多元应用

发布时间：2026-03-24 15:59:21 分类：营销学堂


靶点及简介 ：reversible ERK1/2 inhibitor

VRT752271 (BVD-523, Ulixertinib) 是一种可口服、高度选择性、ATP竞争性、可逆的 ERK1/2 抑制剂，其抑制ERK2的IC50<0.3 nM。


体外研究

    Ulixertinib(VRT752271)是一种可逆的ATP竞争性ERK1和ERK2激酶抑制剂,对ERK2的IC50 <0.3 nM [2]。


体内研究

    在药代动力学研究中,发现该测定的灵敏度和特异性足以准确表征Ulixertinib在Balb/C小鼠中的血浆药代动力学[1]。


激酶实验

    使用ADP Glo Kinase Assay试剂盒进行MEK自磷酸化测定。活化的MEK蛋白在内部表达和纯化。在由50mM Tris（pH 7.5），10mM MgCl 2,0.1mM EGTA，10mM DTT和0.01％吐温20组成的测定缓冲液中制备酶和底物溶液。在测定缓冲液中制备6nM MEK蛋白质并分配2μL进入含有测试和参照对照化合物的384孔白色小体积培养基结合板的每个孔中。向化合物板给药12点剂量响应曲线，从10μM降至0.0625nM，以计算化合物IC 50，测定中的总DMSO浓度为1％。在室温下将酶和化合物预孵育15分钟后，向孔中加入2μL在测定缓冲液中的20μMUltraPure ATP溶液，并且在添加之前使反应在室温下进行90分钟。用4μLADPGlo试剂R1淬灭反应。将板在室温下孵育45分钟，然后加入8μL激酶检测试剂，然后使发光信号平衡60分钟，然后在Pherastar读板仪上读板。


细胞实验

    在由DMEM，10％（v / v）胎牛血清和1％（v / v）L-谷氨酰胺组成的细胞培养基中培养A375细胞。收获后，将细胞分配到黑色的384孔Costar平板中，在总体积为40μL的细胞培养基中每孔产生200个细胞，并在37℃，90％相对湿度和5％CO 2下旋转过夜。孵化器。将测试化合物和参考对照物直接加入细胞板中，加入内部308孔中。将细胞在从30μM至0.03nM的12个点范围内给药，以计算化合物IC50，测定中的总DMSO浓度为0.3％。然后将细胞板在37℃下温育72小时。将细胞固定并通过加入20μL12％甲醛的PBS / A（4％终浓度）和1：2000稀释的Hoechst 33342，室温孵育30分钟进行染色，然后用PBS / A洗涤。使用Cellomics ArrayScanTM VTI成像平台对染色的细胞板进行细胞计数。还将第0天细胞板固定，染色并读取以产生细胞计数基线，用于确定化合物细胞毒性作用以及抗增殖作用。




验证：

参考文献：

[1]. Kumar R, et al. Determination of ulixertinib in mice plasma by LC-MS/MS and its application to a pharmacokinetic study in mice. J Pharm Biomed Anal. 2016 Jun 5;125:140-4.

[2]. Ward RA, et al. Structure-Guided Design of Highly Selective and Potent Covalent Inhibitors of ERK1/2. J Med Chem. 2015 Jun 11;58(11):4790-801.